北京若水合科技有限公司

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

? 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样 本中人白细胞介素10（IL-10）的含量。 ? 有效期：6个月 ? 保存条件：2-8℃

[实验原理] 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人白细胞介素10 （IL-10）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育 并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化 成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人白细胞介素10（IL-10）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

[样本处理及要求] 1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测， 或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟， 或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃ 或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

[需要而未提供的试剂和器材] 1. 酶标仪（450nm） 2. 高加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 4. 蒸馏水或去离子水

[注意事项] 1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室 温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中 不要让微孔干燥掉。 3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。 4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。 5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏 试剂盒中反应试剂的生物活性。 9. 不能使用过期产品。 10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

[试剂准备] 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

[操作步骤] 1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL； 3. 样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸 上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

[实验结果计算] 以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘 制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

[试剂盒性能] 1. 检测范围：1.25 pg/mL – 40 pg/mL。 2. 灵敏度：检测浓度小于 0.1 pg/mL。 3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4. 重复性：板内变异系数小于 10% ，板间变异系数小于 15% 。